最新版本万博app全站:第三节免疫检测技术的基本原理

来源:万博体育英雄联盟| 作者:万博体彩哪里下载|发布时间:2022-08-06 21:05:25
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  • 抗原、抗体反应的原理,利用已知的抗原 检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未 知的抗原 . • 将免疫反应与现代测试技术结合 • 超微量的检测

  • 常用的诊断技术 血凝试验 酶联免疫吸附试验 胶体金免疫技术 放射免疫分析技术

  概念:颗粒性抗原 (细菌、红细胞等)与相应抗 体结合,在一定条件下出现肉眼可见的凝集物, 称为凝集反应。

  1.直接凝集反应  抗原与抗体直接混合作用,出现凝集为阳 性结果。 ①玻片直接凝集法:定性试验 ②试管直接凝集法:半定量试验

   先将可溶性抗原或抗体吸附在颗粒载体上 ( 如 RBC, 乳胶颗粒 ) ,再与相应抗体或抗 原反应,出现凝集为阳性结果。  临床常用的有间接血凝试验、乳胶凝集试 验等。

   先将待检抗原与已知的抗体反应,再加入用已知 抗原吸附的载体颗粒,不出现凝集为阳性结果。 例:乳胶凝集抑制试验检测HCG (妊娠诊断)

  3.中和反应 如抗“O”试验 4.免疫标记技术 概念:用荧光素、酶、同位素等 标记抗体或抗原用以测定相应抗原或 抗体的技术称为免疫标记技术。常用 方法有免疫荧光技术、酶免疫技术、 放射免疫检测技术等。 特点:敏感、特异、快速,能定 性、定量、定位。

  • 酶免疫标记技术 • 荧光免疫分析技术 • 放射免疫分析技术 • 免疫金标记技术

  酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原 在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败 的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的 免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物 放大作用,但不同的酶选用不同的底物 , 将得到不同的颜色反应.

  1、分离 目的:去除游离酶 方法:盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度

  (一)双抗体夹心法 (二)间接法 (三)竞争法 (四)双位点一步法 (五)捕获法测IgM抗体 (六)应用亲和素和生物素的ELISA

  加受检标本(抗原)形成 固相抗体-抗原复合物 洗涤除去其他 未结合的物质

  加酶标抗体生成 抗体—待测抗原—酶标记抗体 的复合物 彻底洗涤 未结合的 酶标抗体

  (二)间接法 间接法是检 测抗体最常用的方 法,其原理为利用 酶标记的抗抗体以 检测已与固相结合 的受检抗体,故称 为间接法。

  加酶标抗抗体: 与固相载体上抗原抗体 复合物结合;洗涤,除去 未结合的酶标抗抗体

  分别测定两管的吸光度值, 根据对照管与测定管吸光度值之比, 计算标本中待测抗原含量

  对照管由于只加酶标抗原,与固 相抗体充分结合,故分解底物显色深; 测定管的显色程度则随待测抗原和酶 标抗原与固相抗体竞争结合的结果而 异。如待测抗原量多,竞争性地抑制 酶标抗原与固相抗体结合,使固相上 结合的酶标抗原量减少。因此,加入 底物后显色反应较弱。

  饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定(主要包括黄曲霉毒素, 简曲霉毒素 ) 饲料中有害微生物的快速筛检 (如沙门氏 菌 )

  ELISA用于农药残留的检测 甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析

  主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松( FN )、 甲氟磷酸异已酶( SOMAN )、 草不绿( Alachor )、 西维因( Carbaryl )、 多菌灵及克菌丹( Captan )等。 植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素

  食品其他检测: 转基因成份的检测:如转基因玉米中中的cry9e蛋白 转基因大豆中的CP4 EPSPS蛋白质.

  肉制品的掺假检测: 以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋A 抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉检测14种 畜禽熟肉制品,包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等,在 掺假率为1%时即可检出

   用荧光素标记抗原或抗体,再与标本中抗体或抗 原反应,然后在荧光显微镜下观察,形成的 IC 可 散发出荧光,对标本中的抗原或抗体进行测定和 定位。  常用的荧光素

  • 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度 的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑 褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定 性或半定量的快速免疫检测。这一反应也可以通 过银颗粒的沉积被放大,称之为免疫金银染色 (immunogold silver staining,IGSS)。

  胶体金(colloidal gold)的制备一般采用 还原法,常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗 坏血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金 溶液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金 原子,形成金颗粒悬液,也称金溶胶(gold

  其原理与层析法相类同,中心圆点为一株 单抗,边上小点为抗鼠二抗。先将待测样 品滴在其中,若有抗原即被结合在中心圆 点,洗去未结合抗原,再滴加金标另一株 单抗,若有抗原则形成金-Ab-Ag•薄膜的红 色斑点,而边上是金-Ab-Ab2•薄膜的质控 点,是为金标二步法。

  • 将金标的一株单抗吸附于下端的玻璃纤维 纸上,浸入尿液,此金标单抗即被溶解, 并随尿液上行,若尿中有相应抗原,既形 成Ag-Ab-金复合物,当上行至中段醋酸纤 维薄膜,即与下端的另一株单抗结合并被 固定下来,显示阳性结果。其上方还有一 条抗鼠二抗,待红色金标单抗上行此处即 被固定下来,作为金标单抗质控的提示。 此种方法称金标一步法。

  IFA 试剂形式 试剂保存 操作步骤 观察时间 阳性反应颜色 浓度 渗滤装置及附 加试剂 4~8℃ 6个月 3~5 3 min 操作结束颜色 不变 ICA 试剂条 室温一年 1 3~20 min 颜色逐渐加深

  – 高灵敏 – 不直接探测待测物,而探测待测物上的标记信 号 (标记物的放大效应)

  1、分离 目的:去除游离放射性核素 方法:柱层析 2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性(mCi/mg)

  • 四环节为: 1、抗体生产 2、 标记试剂制备 3、 分析方式设计 4、分析信号检测

  • 常用免疫测定方法 • 标记免疫法测定的方法及原理 • 标记免疫测定法的特点 • ELISA的方法及原理

  1、何谓沉淀反应?何谓凝集反应?其抗原有 特点? 2、抗原抗体反应有何特性? 3、抗原抗体反应的影响因素有哪些? 4、常用的免疫标记技术有哪些? 5、设计一ELISA试验来检测牛奶中黄曲霉毒 素M1。

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